扫描电镜生物样品制备:从冷冻切片到金属涂覆的步骤


发布时间:

2023-08-23

扫描电子显微镜(SEM)在生物样品研究中广泛应用,但为了在SEM中观察生物样品,需要对样品进行适当的制备。以下是从冷冻切片到金属涂覆的一般步骤,以便将生物样品制备成SEM观察所需的样品

扫描电子显微镜(SEM)在生物样品研究中广泛应用,但为了在SEM中观察生物样品,需要对样品进行适当的制备。以下是从冷冻切片到金属涂覆的一般步骤,以便将生物样品制备成SEM观察所需的样品:

固定样品: 首先,生物样品需要进行固定以保持其结构和形态。常用的固定方法包括使用蛋白质交联剂(如戊二醛)或化学固定剂。

冷冻切片: 将固定的生物样品切割成薄片,通常采用超薄切片技术。这可以通过冷冻切片机将样品冷冻并切成非常薄的切片,以保留其内部结构。

脱水: 从冷冻切片中去除水分,常用的方法是将样品在低温下暴露在低压下,以使水分逐渐升华,而不是通过液体蒸发。

金属涂覆: 生物样品通常不导电,而SEM需要样品表面具有导电性。因此,在观察之前,需要在样品表面涂覆一层薄金属层,通常使用金属蒸发或溅射技术。

金属蒸发: 在真空条件下,将金属(如金或铂)加热至其熔点,使其蒸发并沉积在样品表面,形成一层薄金属涂层。

金属溅射: 使用离子束或电子束将金属靶材溅射到样品表面,也能产生薄金属层。

观察: 经过金属涂覆后,生物样品已准备好在SEM中进行观察。通过在SEM中照射样品表面,收集反射电子或二次电子来生成显微图像。

这些步骤是一般的生物样品制备过程,但需要根据实际情况进行微调和优化。制备的关键是保持样品的结构、形态和细节,同时确保样品表面具有适当的导电性。在每个步骤中,控制实验条件和仪器参数非常重要,以获得高质量的SEM图像。